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利用新型分子标记SRAP构建甘蓝型油菜遗传图谱并进行基因定位---李海涛


华中农业大学大学生科技创新基金(SRF)项目
立 项 申 请 书

项目名称
利用新型分子标记SRAP构建甘蓝型油菜遗传图谱并进行基因定位
申请人
学号、姓名
050311002李海涛
院系
班级
植科院          05级植科5班
联系
方式
87670577
指导教师姓名、职称
刘克德 教授
合作者
姓名、班级
刘 晟     05级植科5班
吴琳琳    05级植科6班
申请项目时间
2007年5月
预定完成时间
2008年5月
立项依据
意义及现状分析
油菜是世界三大油料作物之一,甘蓝型油菜品质优,产量高,是油菜中最重要的栽培品种。应用SRAP标记将控制生物形状的基因定位在遗传连锁图上,为进一步基因克隆以及分子标记辅助(MAS)奠定基础,从而为育种工作提供极大方便,可显著提高育种的选择效率与育种预见性。
近年来,有关甘蓝型油菜图谱方面的研究发展很快。标记的类型从最初的RFLP标记发展到SSRAFLPSRAP等;由单个群体独立的遗传图谱发展为多个群体的整合图谱。但总体说来,目前油菜中可很好利用的分子标记数量很有限,因此需要构建标记密度更高的遗传连锁图。相关序列扩增多态性(SRAP)是近年来发展起来的一种新型的基于PCR的标记系统,它具有简便、中等产量、高共显性、重复性、易于分离条带及测序等优点。
本研究中,我们拟以一个包含192个单株的DH群体构建高密度SSRSRAP标记连锁图,为进一步进行甘蓝型油菜的重要农艺性状如产量、品质性等数量性状位点奠定基础。
研究内容
 
此项目研究主要分为三个部分进行:
1.建立SRAP标记反应体系
2. 扩增产物检测与片段测序
3. 构建包含至少200SRAP标记的遗传图谱
4. 12个农艺性状进行基因定位
技术路线
 
1.确定亲本组合,构建分离群体或衍生系,提取总DNA选择合适绘图的分子标记,根据遗传材料之间的多态性确定亲本组合,建立大量分子标记处于分离状态的分离群体,并提取群体的总DNA
2. 建立SRAP标记反应体系:反应模板是甘蓝型油菜基因组DNA,在一个总体积为20μl的PCR反应体系中,比较不同条件下的扩增效果,选择最优的条件继续下面的研究
3. 扩增产物检测与片段测序:扩增反应结束后,扩增产物在变性的6%的聚丙烯酰胺凝胶上电泳分离;电泳结束后取出凝胶后进行漂洗,染色,再漂洗,最后用显影液适度着色后转入蒸馏水中保持。
4. 构建遗传图谱:将凝胶置于成像系统中扫描,借助计算机及其相关软件作分析处理并构建绘制遗传图谱。
已具备的条件及研究工作的基 础
本校植物科技学院、遗传育种研究室拥有相关的仪器设备、原材料及数种引物。同时,实验室正以甘蓝型油菜为材料对上述问题用其他分子标记方法进行研究。这些条件为本课题的顺利实施奠定了基础。
拟提供的成果及形式
经过实验,我们将对甘蓝型油菜的基因绘制出更高密度的遗传图谱,为其他研究提供更加好的基础。并提交一篇高质量的论文。
申请经费金额及开支预 算
 
拟申请经费:4000 元,其中:
引物合成: 2000元
PCR相关试剂:1500元
凝胶电泳等: 500元
申请人承 诺
我们将本着创新、踏实的原则认真完成此项试验,并在实验过程中节约合理地运用经费。努力学习各项试验技巧和方法,争取得到好的实验结果。
 
 
签名:李海涛
指导教师意见
   
该研究项目有很重要的理论和应用价值,支持申请。
 
 
 
指导教师签名:刘克德
2007年5月14日
院系
评审
意见
 
 
 
负责人签章:
                                                     
学校审批意见
 
 
 
 
 
 
 
负责人签章:
                                                     

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